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ATCC細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)步驟

原載自:www.tajnning.com[技術(shù)資料頻道]  2017-12-21  瀏覽次數(shù):2482

   ATCC細(xì)胞系作為正?;蚰[瘤組織的模式細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā),然而很大一部分的細(xì)胞系被錯(cuò)誤標(biāo)記或被其它個(gè)體、組織、種系來(lái)源的細(xì)胞所替代,由于科學(xué)界無(wú)法解決此類問題以致大量因使用錯(cuò)誤鑒定的細(xì)胞系而導(dǎo)致誤導(dǎo)或存在潛在錯(cuò)誤的學(xué)術(shù)論文發(fā)表。通過近年來(lái)的努力而開發(fā)出的STR分型方法已成為對(duì)人源細(xì)胞進(jìn)行鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法,STR分型的應(yīng)用成為*細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定這一問題的重要一步。
  ATCC細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
  一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
  1)準(zhǔn)備培養(yǎng)基;北美胎牛血清,10%;雙抗1%。
  2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
  3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
  二.ATCC細(xì)胞系的菌種處理:
  1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
  2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

 

 

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